十大功劳属植物究竟立了哪十大功劳？

十大功劳属(Mahonia)植物在我国约有50种 ，分布于南方各地 。该属植物主要以根、茎入药，称“刺黄连 、刺黄柏、功劳木 ”等；有的地区以叶入药
，称“功劳叶”〔1，2〕。有的用作提取“黄连素
”
、异汉防己甲素(isotetrandrine)的原料
。已从该属植物中发现20多种苄基异喹啉类生物碱 ，其中双苄基异喹啉类的尖刺碱(oxyacanthine,Ⅰ)、小檗胺(berbamine,Ⅱ) 、异汉防己甲素(Ⅴ)和原小檗碱类的小檗碱(berberine,Ⅶ)
、药根碱(jatrorrhizine,Ⅳ)、巴马亭(palmatine,Ⅵ) 、非洲防己胺(columbamine,Ⅲ)等成分分布广泛
，含量较高。现代药理实验和临床应用结果表明，这些成分具有抗菌
、消炎、抗病毒 、降血压
、降血脂、抗心率失常 、抗血小板聚集
、抗衰老、镇痛等生理活性〔3～11〕 。

对十大功劳属植物中生物碱成分测定的文献报道较少
。有文献报道用薄层扫描法测定大叶刺黄柏中的Ⅳ 、Ⅵ、Ⅶ〔12〕；用薄层光密度法测定4种十大功劳属植物茎中的Ⅳ
、Ⅵ、Ⅶ 、木兰花碱(magnoflorine)〔13〕；用高效液相色谱法测定十大功劳叶中的Ⅶ〔14〕。作者在用变波长高效液相色谱法测定了小檗属(Berberis)植物根中的生物碱的基础上〔15〕 ，为了开发利用十大功劳属植物资源
，建立了高效液相色谱法测定十大功劳属植物中的Ⅰ～Ⅶ的方法 。这7种成分可用203 nm固定波长1次检测，也可用203～346nm变波长2次检测
。但后者既使7种待测成分在各自的最大吸收波长处检测 ，又避免了吸收波长不同的相邻色谱峰的干扰
，提高了分析的灵敏度和准确度。本文用变波长高效液相色谱法对我国产的十大功劳属3种植物的根
、根皮、根木 、茎皮
、茎木和10种不同产地的植物根中的Ⅱ、Ⅳ 、Ⅵ
、Ⅶ进行了定量分析，Ⅰ、Ⅲ 、Ⅴ因对照品量少 ，只做了定性分析 。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪(510型泵
，490E检测器，U6K进样器 ，Baseline 810色谱工作站)
。

对照品：盐酸小檗碱
、盐酸巴马亭、盐酸药根碱购于中国药品生物制品检定所；非洲防己胺由中国药品生物制品检定所涂国士研究员赠送；小檗胺购于中国科学院林业土壤研究所，经重结晶纯化；尖刺碱 、异汉防己甲素由中国医学科学院药用植物研究所提供(所用对照品经硅胶薄层层析、2种溶剂系统展开为单点；高效液相色谱法测定
，主成分的峰高
、峰面积均在97%以上)。植物标本由中国科学院植物研究所应俊生研究员鉴定 。乙腈为色谱纯，甲醇和磷酸二氢钾为分析纯 ，去离子水
。

2 实验方法及结果

2.1 色谱条件〔15〕

色谱柱：μ-Bondapak phenyl(10μm
，3.9mm×300mm，美国Waters公司)；流动相：0.02mol.L-1磷酸二氢钾-乙腈(7∶3)；柱温：室温；流速：1.0mL.min-1；灵敏度：0.08AUFS；检测波长：固定波长用203nm ，变波长0.0～10.0min用203nm
，10.0min以后用346 nm。7种生物碱对照品的色谱图见图1 。

图1 7种生物碱对照品的色谱图(203 nm检测)

Ⅰ.尖刺碱 Ⅱ.小檗胺 Ⅲ.非洲防己胺Ⅳ.药根碱

Ⅴ.异汉防己甲素 Ⅵ.巴马亭 Ⅶ.小檗碱

2.2 回归方程及线性范围

按文献〔15〕，以进样量(μg)为横坐标(X) ，峰面积(microvolt-sec)为纵坐标(Y)
，求得回归方程见表1。

2.3 样品溶液的制备

精密称取干燥样品粉末0.1g于50mL磨口三角瓶中，加甲醇20mL ，称重
，浸泡12h，超声提取60min ，称重，补足损失的甲醇
，摇匀，密闭 ，静置；取5.0mL上清液于离心管中
，密闭，离心(10000r.min-1 ，10min)；取上清液(2.0mL)作为样品溶液
。

表1 4种生物碱定量分析的回归方程和线性范围

成分

回归方程

r

线性范围/μg

Ⅱ

Y=9.017X×104+4.318×105

0.9993(n=7)

0.019～0.296

Ⅳ

Y=4.239X×104-8.228×104

0.9999(n=9)

0.019～0.996

Ⅵ

Y=4.191X×104+1.446×105

0.9998(n=9)

0.020～1.008

Ⅶ

Y=4.209X×104+1.278×105

0.9998(n=9)

0.020～1.010

2.4 精密度试验〔15〕

精密吸取一样品溶液10μL进样
，重复测定10次。求得样品中各成分浓度(μg.mL-1)的RSD(%)：小檗胺 0.28，药根碱 0.84 ，巴马亭 0.75
，小檗碱 1.21 。

2.5 加样回收率试验

分别精密称取狭叶十大功劳茎的干燥粉末0.05g5份于50mL磨口三角瓶中，按文献〔15〕操作 ，每份重复测定3次；计算Ⅱ、Ⅳ 、Ⅵ
、Ⅶ的回收率
，分别为97.2%～102.1%、98.9%～100.3% 、97.2%～100.1%
、99.4%～100.1%，RSD分别为2.0%、0.62% 、1.3%
、0.30%
。

2.6 样品分析〔15〕

精密吸取样品溶液10μL进样 ，用203～346nm变波长检测，对Ⅱ、Ⅳ 、Ⅵ
、Ⅶ进行了定量分析
，对Ⅰ、Ⅲ定性分析。再精密吸取10μL进样，用203nm固定波长检测 ，得到各样品的特征图谱
，并定性分析成分Ⅴ 。对十大功劳属3种植物的根 、根皮、根木
、茎皮、茎木和10种不同产地的植物根中的7种生物碱的分析结果见表2 、3
。

3 讨论

3.1 本文建立的方法能在同一个色谱条件下25min

表2 3种十大功劳属(Mahonia)植物不同部位7种生物碱分析结果(%，n=2)

植物名称

部位

Ⅰ

Ⅱ

Ⅲ

Ⅳ

Ⅴ

Ⅵ

Ⅶ

甘平十大功劳 Mahonia eurybracteata Fedde subsp.ganpinensis(H.Leveill)T.S.Ying et Boufford

(四川省中药学校)

根

-

±

+

0.68

+

0.05

0.78

根皮

+

0.01

-

1.66

+

0.14

3.76

根木

+

±

+

0.69

+

0.06

0.84

茎皮

-

±

-

0.34

+

0.05

0.47

茎木

+

±

-

0.53

+

0.08

0.21

狭叶十大功劳 M.fortunei(Lindl.)Fedde

(重庆南川药物种植所)

根

+

0.34

+

1.17

+

0.06

1.27

根皮

+

0.98

+

3.02

+

0.20

3.54

根木

+

0.18

+

0.54

+

±

0.70

茎皮

+

0.29

+

1.47

+

0.19

0.41

茎木

+

0.28

+

0.98

+

0.05

1.36

长苞十大功劳 M.longibracteata Takeda

(四川峨边)

根

+

±

+

0.40

+

0.62

1.73

根皮

+

±

+

1.10

+

1.30

6.94

根木

-

±

+

0.33

+

0.80

0.98

茎皮

-

±

+

0.74

-

0.60

1.24

茎木

-

-

+

0.21

-

0.28

0.45

+：检出该成分 -：未检出该成分 ±：含量＜0.01%

表3 10种十大功劳属(Mahonia)植物根中7种生物碱分析结果(% ，n=2)

植物名称

产地

Ⅰ

Ⅱ

Ⅲ

Ⅳ

Ⅴ

Ⅵ

Ⅶ

阔叶十大功劳 Mahonia bealei(Fort.)Carr.

四川峨边

+

±

+

0.44

+

0.78

1.44

重庆奉节

+

0.02

+

0.50

+

0.64

2.07

鼠刺十大功劳 M.bodinieri Gagnep.

重庆金佛山

+

0.10

+

0.81

+

0.09

0.77

重庆药物种植所

+

0.08

+

0.79

+

0.06

1.11

重庆中药研究院

+

±

+

0.41

+

0.05

0.78

湖南新化*

+

±

+

0.16

+

0.53

1.44

川鄂十大功劳M.eurybracteata Fedde subsp.eurybracteata

四川峨眉山

-

±

+

0.45

+

0.14

1.10

四川峨边

-

±

+

0.82

+

0.12

1.22

重庆缙云山

+

±

+

0.35

+

0.02

0.73

甘平十大功劳 M.eurybracteata Fedde subsp.ganpinensis(H.Leveill)T.S.Ying et Boufford

重庆南川

+

0.01

+

1.01

+

0.04

1.58

四川省中药学校

-

±

+

0.68

+

0.05

0.78

狭叶十大功劳 M.fortunei(Lindl.)Fedde

重庆药物种植所

+

0.34

+

1.17

+

0.06

1.27

四川峨眉山

+

±

+

0.82

+

0.06

1.42

湖南新化*

+

0.19

+

0.88

+

0.07

0.59

细梗十大功劳 M.gracilipes(Oliv.)Fedde

四川峨眉山

-

±

+

0.67

+

0.15

0.99

长苞十大功劳M.longibracteata Takeda

四川峨边

+

±

+

0.40

+

0.62

1.73

岩紫黄 M.nitens Schneid.

四川峨眉山

-

0.02

+

1.05

+

0.17

0.55

多齿十大功劳 M.polyodota Fedde

四川峨眉山

-

0.02

+

0.67

+

0.10

0.52

重庆金佛山

-

0.01

+

0.22

+

0.13

0.30

M.sp.(未定种名)

重庆金佛山

-

0.01

+

0.28

+

1.38

1.30

+：检出该成分 -：未检出该成分 ±：含量＜0.01% *：测定部位是茎

内测定十大功劳属植物不同部位以及不同产地植物中的Ⅰ
、Ⅱ、Ⅴ 3种双苄基异喹啉类和Ⅲ 、Ⅳ
、Ⅵ、Ⅶ 4种原小檗碱类生物碱。方法的重现性好 、精密度高
、适用范围广 。

3.2 十大功劳属与小檗属植物亲缘关系相近
，化学成分相似
。研究结果表明：能用相同或相近的HPLC色谱条件测定这两属植物中相同的生物碱成分。

3.3 在所测定的10种植物中，Ⅲ的峰很低 ，参照Ⅳ、Ⅵ 、Ⅶ的分子结构和峰面积
，推测Ⅲ的含量低于0.01% 。Ⅰ和Ⅱ除狭叶十大功劳外，在其余植物中的峰较弱 ，含量较低；Ⅴ的峰在大多数植物中很强
，含量高(本实验中因对照品量少，未定量)
。

3.4 这7种成分在该属植物不同部位中的分布
、含量有一定差别 ，其差异程度随植物种类不同而异。含量基本上以根皮中最高，茎皮中次之
，然后是根木部、茎木部 。以往多以茎入药〔1〕，但从分析结果看 ，其根也是不可忽视的资源。

作者单位：吕光华 华西医科大学药学院 成都610044

王立为 陈立民 肖培根 中国协和医科大学 、中国医学科学院药用植物研究所北京100094

参考文献

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15 吕光华 ，陈建民，肖培根.改变检测波长HPLC法测定小檗属植物中的生物碱.药学学报
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